核酸檢測“假陽性”是如何發生的？專家提示這幾大可能

因靈敏性和特異性高，使用PCR技術的核酸檢測成為新冠病毒檢測的“金標準”。但近期多地開展的大規模核酸篩查工作中，還是出現了多起由第三方檢測機構引發的“假陽性”事件。

多名接受第一財經采訪的專家和檢測行業人士均表示，PCR核酸檢測技術已經相對成熟，出現“假陽性”并不意味著“金標準”失靈。但現階段，在采樣環節和檢測環節，影響核酸檢測結果的因素還有很多，比如耗材質量不達標、試劑盒靈敏度不高，包括不同廠商的試劑盒判定陽性的Ct值略有差異等因素，以及實驗室檢測機器維護不到位、標本取材時被污染、樣本存放的溫度和時間不合格、檢測過程不規范等人為因素，都可能對檢驗結果造成影響，造成“假陽性”出現。

“不過，對于同一檢測機構數次出現多個‘假陽性’樣本的現象，需要引起社會和政府部門的高度警覺。尤其是在大城市進行區域核酸篩查和流調溯源工作時，由于人口基數大，即便是小概率事件，也會波及一定規模的人群。基于此，監管人員應該進一步深入實驗室環節，壓實責任，堵住各項風險點。” 復旦大學公共衛生學院教授姜慶五在接受第一財經采訪時稱。

4月15日，工作人員在核子華曦核酸檢測方艙實驗室的樣本暫存間忙碌。新華社

不止一起“假陽性”發生了

目前，國內外實驗室普遍采用的核酸檢測方法是熒光PCR法。“PCR”是聚合酶鏈式反應的簡稱，在該種檢測方式下，實驗室人員需要通過使用化學物質從樣本中提取病毒RNA，再將該RNA轉化為DNA。為了檢測病毒，DNA的微小片段被放大，并在一些特殊熒光染料的幫助下，讓樣本擴增，最終根據熒光的亮度來識別陽性或陰性。

單就方法論而言，PCR檢測技術可靠性高，是國內外公認的新冠病毒檢驗的“金標準”。

國家衛生健康委臨床檢驗中心副主任李金明在3月15日的國務院聯防聯控機制發布會上曾表示，核酸檢測在方法學上特異性是100%。也就是核酸檢測在方法學上沒有假陽性，做的就是真的。

但是，假陽性發生了不止一起。

4月23日，安徽合肥發布通告，對兩家核酸檢測機構合肥和合醫學檢驗實驗室與合肥諾為爾醫學檢驗實驗室給予警告并暫停合作的通報。

根據通報，上述兩家單位在蜀山區區域核酸檢測中，超能力承攬檢測業務、嚴重超過承諾時間出具檢測報告，影響合肥市對疫情形勢及時研判，更為嚴重的是，此前已多次發生類似情況，有的還幾次出具“假陽性”報告，嚴重干擾了合肥疫情防控大局。

5月9日，北京市衛生健康委員會副主任、新聞發言人李昂在新聞發布會上表示，在近期的飛行監督檢查中發現，個別核酸檢測機構存在送檢不及時、報告不準確、實驗室管理不嚴格等問題，嚴重影響核酸檢測質量和疫情防控工作效果。

多名受訪人士稱，面對區域散發或規模性疫情，核酸檢測工作環節繁復，在采樣和檢測環節，均存在引發“假陽性”樣本出現的可能性。

實驗室環節是主要風險點

實驗室環節是形成“假陽性”的主要風險點。

根據PCR檢測流程，一份樣本從進入實驗室到出結果，需要經過標本前處理、核酸提取、加樣上機擴增、結果分析等多個環節。

廣西華銀醫學檢驗所臨檢實驗室主任李旺在接受第一財經采訪時表示，從核酸提取到擴增的全過程，每板檢測都會有陰性或陽性質控品，起質量控制參照的作用，而這一過程中，陽性質控品可能受到污染。

“比如，在對標本進行前處理，要一個個擰開蓋子，用加樣槍吸取標本進行核酸提取，在加樣或者點樣過程中，就有可能造成邊上的孔被污染，標本一旦被濺到或者被污染到，后面上機檢測進行擴增的時候，即便只是極少的一點DNA片段，都可能造成陽性的結果。”李旺稱。

4月7日，檢測技師在進行核酸檢測工作。新華社

環境污染也是形成“假陽性”的重要實驗室原因。李旺稱，如果實驗室在防污染方面沒有做到位，那可能實驗室本身就已經存在污染，在這樣的環境中進行檢測，就有可能造成假陽性。

另外，有專家指出，目前主流熒光PCR法，其陽性質控物等的擴增產物若處理不當極易形成氣溶膠污染實驗環境從而出現假陽性，且短期內很難清除，這一問題表面上可通過更換不同的試劑予以解決，但目前新冠試劑大多都采用相同的引物探針序列，擴增區域大同小異，因此實際上也不能很好的解決擴增產物污染問題。

業內其實早已注意到該問題。在已發布的《車載核酸檢測生物安全實驗室》標準中就明確規定，必須同時配備核酸DNA和RNA兩種檢測體系的試劑和相應配套設備，在作業現場時第一時間對疑似結果進行復測，排除只采用PCR可能引起的假陽性。此方式當然同樣適用于常規新冠核酸檢測場景。

為減少人員操作不當引起的質控品污染或環境交互污染等現象，在第三版《區域新型冠狀病毒核酸檢測組織實施指南》中提到，嚴格落實實驗室準入和人員準入要求，制定實驗室標準化流程，嚴防實驗室污染和實驗室內交叉感染。

除了人為因素外，一名地方疾控中心檢驗科的檢驗人員還對第一財經透露，實驗室耗材質量不達標也可能造成“假陽性”。

他舉例稱，八連管是核酸檢測試劑的必備耗材，如果八連管質量不好，比如封蓋沒封緊或者受熱性不好，在加熱過程中出現融化、體積變化、漏蓋等情況，均會影響樣本的熒光度，進而導致“假陽性”。

在實驗室結果分析環節，檢驗設備的超負荷運作和試劑盒靈敏度不高也會出現檢測結果的“假陽性”。

上述檢測人員表示，當實驗室檢測機器長時間、高頻率運作或者未能及時維護到位，檢測結果或存在不精準，乃至出現“假陽性”。

檢測試劑盒也是一個需要

的因素。該檢測人員稱，即便目前用于PCR檢測的試劑盒準確度都不低，好一點的可能在99%點幾的水平，稍差一點的也在95～99%的區間，但卻鮮有生產商可以確保100％的準確率。

另外，因為不同第三方檢驗機構選擇的核酸檢測試劑盒來自不同廠商，而不同廠商的試劑盒判定陽性的Ct值可能略有差異。比如，思路迪試劑Ct值小于等于39.5判定為陽性；而伯杰試劑則是以Ct值小于等于40判定為陽性。

受此影響，Ct值處于臨界值附近的人群，可能會因為負責該樣本的檢驗機構不同，結果也不同，即有的檢測結果為弱陽性，有的則為陰性的。而由第三方檢測機構判定為弱陽性的人群，也有可能在相關醫院復核后檢測結果為陰性。

“即使是同一個試劑盒，如果CT值處于臨界點，也可能出現這次測出來是陽性、下次測出來是陰性的現象。”李旺補充稱。

思路迪試劑和伯杰試劑都經過藥監部門的規范審批，不過思路迪試劑屬于快檢試劑，且是快檢試劑中較快的一類，僅45分鐘就會出結果，復檢試劑伯杰屬于正常試劑，要90分鐘才能出結果。

有專家表示，快檢試劑的優勢是“快”，比一般的試劑要提高近40%的產能，即同樣的樣本檢測時間是4小時，用快檢試劑，兩個多小時即可出結果。但有些快檢試劑的問題是，相對于正常的試劑，“假陽性率會略高”。

采樣環節也有隱患

雖然實驗室是造成核酸結果“假陽性”的主要環節，但在核酸采樣時同樣存在隱患。

病毒學專家常榮山還對第一財經表示，根據采樣標準，采樣人員配戴的面屏應每檢一次就要消殺一次，但由于時間緊、任務重，在實際工作中，常常難以做到。

“在此背景下，被采人如果是陽性感染者，其近距離呼出的氣溶膠可能粘在采樣人員的塑料面屏上，當面屏上的病毒量足夠多，并在短時間內轉移到采樣人員的手上，再觸碰到下一個被采人的采樣管壓蓋上，也會帶來污染，測出’假陽性’。”常榮山稱。

同時，“新冠疫苗會導致采樣的’假陽性’”，李旺稱，如果剛打了疫苗就采樣或者核酸采樣點距離疫苗接種點比較近，都有可能造成結果假陽性，這是采樣環節中比較常發生的。

對于采樣、檢測等環節的風險，該如何壓實責任，堵住各項風險點？

第三方實驗室：加強質量監管監管

面對實驗室檢測環節存在的多個質量控制風險點，多名受訪人士稱，如何監管、落實已有的實驗室標準是降低“假陽性”發生率的關鍵。

“對于進行檢測的實驗室，在實驗前要先對實驗室進行清潔消毒，實驗后也要做好清場，盡量防止實驗室污染。最后，檢測人員最好使用獨立的加樣槍去加陽性質控品，同時提高防污染意識，避免把陽性質控品不小心濺到隔壁的其他樣本中。”李旺稱。

由于近期曝光的多例大批量“假陽性”事件均和第三方檢測機構有關，姜慶五還建議，各地臨床檢驗中心需要進一步細化對第三方檢測機構的監督方法，同時加大對其監管頻次和強度。“比如，當臨床檢驗中心在對第三方檢測機構抽查時，可以放一批盲樣，讓這些機構現場給出結果，進而更客觀地判定該機構檢測的假陽性率。”

李昂在5月9日的發布會上就表示，北京市衛健委依法依規，對涉事核酸檢測機構進行嚴肅處理。第一時間同機構法定代表人進行誡勉約談，要求切實開展深入檢查和分析，認真查找問題原因，嚴防出現質控管理方面的系統性問題；要求該機構暫停執業活動，停止承接新冠病毒核酸檢測業務，根據進一步調查情況依法依規進行處理。

同時開展全市核酸檢測機構監督檢查。加強協作，形成安全質量監管合力。強化行業管理和溝通協調，聯合藥監、公安等部門建立核酸檢查質量聯合監管工作機制，開展“亮劍”專項治理行動，進一步加強新冠病毒核酸檢測實驗室質量監管，完善工作流程，加強過程審核把關等。

最后也實施可疑病例和陽性樣本檢測全流程追溯，對核酸檢測工作規范、質量把關嚴的機構予以通報表揚，核酸檢測任務給予傾斜，對核酸檢測質量不符合標準的機構，進行通報批評，依法依規調查處理。

加強復核：避免給所涉群體帶來不必要損失

另外，核酸檢測結果的復核工作顯得尤為關鍵。

在復核操作層面，常榮山提出三點建議：其一，可以.換個采樣部位，從鼻子換到咽部，或者從咽部換到鼻子，進行采樣；其二，換成不同廠家的試劑重做；其三，采樣血清樣本，檢測IGM，如果是陽性，陽性值還比較高，說明還處于感染期，或者感染后期。

由于核酸檢測“假陽性”并非0概率事件，多名受訪人士還稱，在區域大規模核酸檢測中，應該確保復檢流程的規范性，并最大可能降低人力、物力成本，避免出現額外的病毒傳播現象。

金域醫學方面向第一財經表示，在實驗室完成檢測后，第三方檢測機構會按照衛健委的操作指南，將碰到疑似陽性的樣本需要直接報給疾控部門，由疾控部門復檢后出具報告。

根據第三版《區域新型冠狀病毒核酸檢測組織實施指南》，如果是單采樣本檢測結果陽性時，需通知120負壓救護車進行陽性感染者轉運；通知集中隔離管理設施準備接收該陽性感染者；通知陽性感染者所在社區（小區）找到并控制該陽性感染者；通知公安機關協助進行陽性感染者轉運，并開展該陽性感染者軌跡排查；通知疾控部門開展后續的流調溯源、密接排查和社區封控等工作。

如果是混采檢測陽性時，則需立即原地隔離所涉人員并進行單采復核。混采陽性單采復核要求鼻咽、口咽雙采單檢。混采檢測陽性處置工作應在6小時內完成。

“但在實際落地過程中，各地對于混采陽性的情況，處置方式可能也略有差異。比如，有的地區可能會將相關人員送至隔離酒店等待結果，有的則可能直接被送至方艙醫院。”上述地方疾控中心檢測人員稱。

姜慶五稱，如果不能區分對待混采檢測陽性和單采檢測陽性人員，這不僅是在流程上不符合規范，還會給所涉群體帶來不必要的損失，需要引起重視。

“尤其是在抗原檢測推廣后，一部分人群可能在混采檢測中核酸檢測為弱陽性，但自身抗原檢測為陰性，在這一群體中就存在‘假陽性’的可能性。對此，復檢工作流程標準化、操作精準化很關鍵。” 姜慶五稱。

本文轉自:第一財經